慢病毒浓缩试剂盒细胞分离液干细胞培养基免疫细胞培养基神经干细胞ECL检测试剂盒骨髓间充质干细胞miRNA qPCR检测试剂盒慢病毒包装系统腺病毒相关产品感受态细胞BCA动物细胞基础培养基基因敲除/定点突变试剂盒标签抗体寄生虫阳性血清生化试剂eTRI ReagentFISH项目流式项目人MTHFR基因多态性检测试剂盒(荧光PCR法)美国进口Caprico流式抗体官方授权一级代理现货促销中基因测序基因调取载体改构定点突变基因合成RT-PCRReal-Time PCR转染级质粒大量提取基因组DNA提取Red/ET重组技术cDNA文库构建TaqMan探针合成基因工程平台shRNA表达载体构建mirshRNA表达载体构建有效shRNA筛靶套餐RNA干扰主体实验RNA干扰回复实验套餐MicroRNA的过表达、下调及检测MicroRNA靶基因验证套餐lncRNA验证服务RNA干扰平台腺病毒包装慢病毒包装腺相关病毒包装病毒包装平台原核表达服务酵母表达服务昆虫细胞蛋白表达哺乳动物细胞蛋白表达GST pull-down免疫共沉淀蛋白生物信息套餐多肽合成抗原设计与表达蛋白工程平台单克隆抗体制备多克隆抗体制备抗体标记抗体纯化ELISAWestern Blot抗体诊断试剂订制抗体工程平台诱导多潜能干细胞 (iPSC)原代细胞培养传代细胞培养稳定细胞系筛选细胞转染细胞表型检测免疫荧光双荧光素酶启动子检测细胞工程平台动物建模病理检测毒理药理试验Yrbio组织标本库病理毒理药理平台人源肿瘤致裸鼠成瘤模型小鼠大脑中动脉暂时性脑缺血模型小鼠肝脏疾病造模动物建模基因库载体库启动子库MicroRNA库miRNAshRNA库细胞库医药研究检验医学转化医学肿瘤研究CRISPR/Cas9载体构建TALEN载体构建基因编辑细胞系构建常见问题技术文档客户已发表文章平台介绍技术优势
慢病毒包装

慢病毒简介:

慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷Ⅰ型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体可以将外源基因或外源的shRNA有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达目的序列的效果。在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,从而达到良好的的基因治疗效果。对于一些较难转染的细胞, 如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,使用慢病毒载体,能大大提高目的基因或目的shRNA的转导效率,且目的基因或目的shRNA整合到宿主细胞基因组的儿率大大增加,能够比较方便快捷地实现目的基因或目的shRNA的长期、稳定表达。

所以,在体外实验及体内实验的研究中,慢病毒己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且正在获得越来越广泛的应用。

慢病毒包装系统组成:

慢病毒包装系统一般由慢病毒表达载体和慢病毒包装载体组成。

慢病毒表达载体,即通常所说的穿梭载体,包含了包装、转染、稳定整合所需要的遗传信息。而慢病毒包装质粒可提供所有的转录并包装RNA到重组的假病毒载体所需要的所有辅助蛋白。为产生高滴度的病毒颗粒,需要利用表达载体和包装质粒同时共转染细胞,在细胞中进行病毒的包装, 包装好的假病毒颗粒分泌到细胞外的培养基中,离心取得上清液后,可以直接用于宿主细胞的感染。

现在的慢病毒包装系统一般都是三质粒或四质粒包装系统。其中四质粒系统比三质粒系统在生物安全性上更好一些,所以应用较多。

赢润生物慢病毒包装系统:

目前市面上常见的商业化慢病毒包装系统较多,其中常用的有Clontech 、Invitrogen 等公司的相关产品。赢润生物通过大量实验摸索,博采众家之长,建立起了一套稳定、可靠、高效的慢病毒包装系统。这套慢病毒包装系统, 其慢病毒表达载体主要来自Clontech公司,包括以下载体:

载体名称

出品公司

用途

启动子

荧光标记

真核筛选标记

pLVX-IRES-ZsGreen1

Clontech

表达基因

CMV

ZsGreen1

pLVX-IRES-tdTomato

Clontech

表达基因

CMV

tdTomato

pLVX-IRES-neo

Clontech

表达基因

CMV

Neo

pLVX-IRES-puro

Clontech

表达基因

CMV

Puro

pLVX-Puro

Clontech

表达基因

CMV

Puro

pLVX-AcGFP1-N1

Clontech

表达基因

CMV

AcGFP1

Puro

pLVX-DsRed-Monomer-N1

Clontech

表达基因

CMV

DsRed-Monomer

Puro

pLVX-EGFP-IRES-neo

YRgene

表达miRNA

CMV

EGFP

Neo

pLVX-EGFP-IRES-puro

YRgene

表达miRNA

CMV

EGFP

Puro

pLVX-shRNA1

Clontech

表达shRNA

hU6

Puro

pLVX-shRNA2

Clontech

表达shRNA

hU6

ZsGreen1

pYr-LVsh

YRgene

表达shRNA

hU6

EGFP

Puro

您可以根据需要,选用合适的穿梭载体,用来装载目的基因或者目的shRNA 。在实际使用过程中,我们发现Clontech配套的慢病毒包装质粒不是很好用,出毒效率不高,所以, 我们采用了Invitrogen公司的惺病毒包装质粒来进行配套,其包括pLPl 、pLP2 、pLP/VSVG三个质粒。将这三个质粒与Clontech的慢病毒表达载体进行混合,导入293T包装细胞,能够高效地出毒。

慢病毒包装流程:

(一)表达基因用慢病毒包装流程:

实验步骤服务描述服务周期
1客户选择目的基因、穿梭载体,Yrbio 负责实验设计1周
2客户提供目的基因,或从Yrbio 基因库中购买该基因1周
3将目的基因的CDS 区构建至慢病毒表达载体上2 - 3 周
4慢病毒包装、出毒3 - 4 周

(二)表达shRNA 用慢病毒包装流程:

实验步骤服务描述服务周期
1客户选择靶基因或目的shRNA、穿梭载体, Yrbio 负责实验设计1周
2将目的shRNA 构建至慢病毒表达载体上2 - 3 周
3有效shRNA 筛选( 筛靶套餐,保证至少一条shRNA有效,可选)3 - 4 周
4慢病毒包装、出毒3 - 4 周

慢病毒包装价格及周期:

表达基因或shRNA滴度价格周期
表达基因(<2K)1x108 TU5000元3~4周
1x109 TU询价:service@yrgene.com3~4周
更高滴度询价:service@yrgene.com3~4周
表达基因(2K~2.5K)1x108 TU5500元3~4周
1x109 TU询价:service@yrgene.com3~4周
更高滴度询价:service@yrgene.com3~4周
表达基因(2.5K~3K)1x108 TU6000元3~4周
1x109 TU询价:service@yrgene.com3~4周
更高滴度询价:service@yrgene.com3~4周
表达基因(>3K)询价:service@yrgene.com5~6周
表达shRNA(单条)1x108 TU3000元3~4周
1x109 TU5000元3~4周
更高滴度询价:service@yrgene.com3~4周
表达shRNA(三条,保证至少一条有效)1x108 TU12000元3~4周
更高滴度询价:service@yrgene.com3~4周

慢病毒对照价格及周期:

服务内容滴度服务价格(元)服务周期
Lv-EGFP-puro(表达基因用对照)(绿色荧光)1x108TU1500现货
1x109TU2500现货
更高滴度询价:service@yrgene.com现货
Lv-copGFP-puro(表达基因用对照)(绿色荧光)1x108TU1500现货
1x109TU2500现货
更高滴度询价:service@yrgene.com现货
Lv-tdTomato-puro(表达基因用对照)(红色荧光)1x108TU1500现货
1x109TU2500现货
更高滴度询价:service@yrgene.com现货
Lv-DsRed-Monomer-puro(表达基因用对照)(红色荧光)1x108TU15003-4 周
1x109TU25003-4 周
更高滴度询价:service@yrgene.com3-4 周
Lv-shNC(表达shRNA用对照)(绿色荧光)1x108TU1500现货
1x109TU2500现货
更高滴度询价:service@yrgene.com现货

客户须知:

  1. 上述价格均不包括运输费用。

  2. 如客户所需包装的目的基因由客户提供,则客户应提供所要构建慢病毒的目的基因的序列及其它相关说明信息(例如装载载体、质粒图谱、酶切位点等)。客户应对所提供的材料及信息负责,如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。

  3. 如shRNA靶序列由客户提供,则本公司只负责证明包含有该shRNA序列的慢病毒构建成功,而不对其干扰效率做任何保证。

  4. 如客户需委托本公司使用包装好的慢病毒感染目的细胞,建立稳定表达目的基因或目的shRNA的细胞株,则相关实验费用另外计算。


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