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产品概述： CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats) 是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中，Cas蛋白（CRISP-associated protein）含有两个核酸酶结构域，可以分别切割两条DNA 链。一旦与 crRNA（CRISPR RNA）和 tracrRNA 结合形成RNA复合物，Cas 蛋白中的核酸酶即可对与RNA复合物结合的 DNA 进行切割。切割后 DNA 双链断裂从而使入侵的外源 DNA 降解。 赢润生物基于CRISPR/Cas9技术强势推出GeneDeltaTM基因敲除试剂盒和基因定点突变试剂盒，本试剂盒将crRNA及tracrRNA序列整合成为sgRNA序列，正确引导Cas蛋白切割目标DNA序列或进行定点突变，具有高效快速、操作简单、准确度高等优点，可广泛用于体内和体外水平的基因敲除或基因订单突变研究。 *本试剂盒中使用的是用cas9蛋白，其来自Streptococcus pyogenes，由于PAM识别序列仅为2个碱基（GG），因此可以在所有的基因中找到大量靶点，从而得到广泛的应用。Cas9 蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性，包括细菌、酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别 RNA（gRNA）可以通过载体表达或者化学合成后与 Cas9 蛋白共同进入细胞，对特异 DNA 序列剪切，从而促使 DNA 发生 NHEJ ( nonhomologous end-joining)介导的基因缺失或同源重组，实现基因敲除及敲入。
产品信息： 针对NCBI上已经录入的每个基因，赢润生物均可提供相对应的基因敲除/定点突变试剂盒。您在订购时，只需要告诉我们您的目的基因名称或定点突变位点即可。
附：敲除载体信息： 该Cas9/sgRNA载体可在哺乳动物细胞内同时表达人源化Cas9蛋白和sgRNA，只需转染一个质粒及表达嘌呤霉素抗性基因的pCMV-puro质粒就能实现对靶基因的切割。载体中的 CMV 启动子可在绝大多数哺乳动物细胞中高效表达。人源化的Cas9蛋白现已证实在人，大鼠和小鼠细胞中表达良好。U6启动子属III类RNA启动子，有精确地转录起始位点和终止位点，可以准确的转录出sgRNA，并且在各种动物细胞中都表达良好。识别的靶序列由 U6 启动子起始信号 G，19nt靶点以及PAM序列NGG构成，因此识别靶点为GN19GG。 目前本公司已开发出上百个人类基因有效敲除的GoldTestTM靶点载体，有效基因敲除的靶点载体验证工作持续开展中，全力打造国内最大的预验证基因敲除靶点库。
产品有效性验证标准流程： 1.设计包含sgRNA切割序列的高特异性PCR引物，PCR产物长度在200-400bp范围内，sgRNA切割位点需在PCR产物中间位置； 2.sgRNA靶点载体转染293T细胞，72h后提取细胞基因组DNA； 3.以第二步获得的基因组DNA为模板，利用第一步设计的引物进行测序； 4.有效的sgRNA靶点载体处理过的细胞系后，其基因组DNA测序峰图中可显出嵌套杂峰。
*试剂盒内均附详细实验步骤说明书
QQ：12695920 Email：service@yrgene.com Tel：400-666-9168 / 0731-84317068 |
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