动物建模

服务简介:

人类疾病的动物模型(animalmodelofhumandisease)是指各种医学科学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物,动物疾病模型广泛应用于疾病机制研究、新药靶点发现及筛选、药效评价、转化医学等医学前沿领域。

赢润生物模式动物中心拥有大型SPF级、普通级动物饲养基地和生理生化分析设备,可独立开展SPF级和普通清洁级的大、小鼠的饲养及相关动物实验,并提供针对不同靶点、不同疾病的多种抗肿瘤和抗炎症的动物模型。赢润生物作为领先的技术服务提供商,将以高端专业的服务团队、精准高效的服务质量为您提供实验动物整体解决方案。

抗肿瘤药效评价

药效评价的相关内容及注意事项

 一、给药时间

       从伦理学的角度出发,一个新的细胞毒类抗肿瘤药物最初的临床受试者均应是晚期的、其他手段治疗无效的患者。与之对应,临床前试验也应该在动物肿瘤生长至一定程度时开始给药,并且若肿瘤体积太小,动物体内残留的NK细胞可能抑制肿瘤的生长,干扰对药效的观察,故不主张动物接种肿瘤细胞后即刻开始给药。通常待移植肿瘤至少生长至约100mm3后将动物随机分组。并于当天给药[1]。若是转移模型,一般是一旦发生转移立即给药。 

二、给药频率及周期

       应根据受试物的药代动力学特点、毒性反应等确定给药频率及周期,如果多次给药的话,一般要结合药物代谢特点,通过血药浓度来判定药物在体内的稳态时的给药间隔,且稳态浓度需要在治疗窗内,一般间隔1-2天给药一次。 

三、人道终点的设定 

什么是载体?

载体(vector)是在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和细菌病毒和动植物病毒。

运转载体

在基因操作过程中使用运载体有两个目的:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。现在所用的运载体主要有两类:一类是细菌细胞质的质粒,它是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1~200 kb左右,kb为千碱基对),有的一个细菌中有一个,有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移,可以独立复制,也可整合到细菌染色体DNA中,随着染色体DNA的复制而复制。另一类运载体是噬菌体或某些病毒等。现在人们还在不断寻找新的运载体,如叶绿体或线粒体DNA等也有可能成为运载体。

作为运载体必须具有三个条件

什么是启动子

启动子是DNA模板上专一地与RNA聚合酶结合并决定转录从何处起始的部位,也决定基因的转录效率。生物中有许多启动子,如大肠杆菌约有2000个启动子。各启动子的效率可不相同,大肠杆菌的强启动子每2秒钟启动一次转录,而弱启动子每10分钟才启动一次,从百多个大肠杆菌启动子结构的分析,得知两个强启动子的同源序列的中心在转录起始部位(基因编码链上第一个核苷酸) 5'侧约10和35个核苷酸处,弱启动子序列中往往有多处核苷酸被置换。

真核生物的启动子部位与原核生物不同,而且启动转录的活性,除需启动子外,还需某些外加序列。

启动子在遗传学中是指一段能使基因进行转录的去氧核糖核酸(DNA)序列。启动子可以被RNA聚合酶辨认,并开始转录。在核糖核酸(RNA)合成中,启动子可以和决定转录的开始的转录因子产成相互作用,继而控制细胞开始生产哪一种蛋白质。

完全的启动子称为规范序列。

启动子元件

启动子代表一些重要的元件可以与其他调节区域(如增强子、沉默子、边界元件或绝缘子)合作一致,以主导基因转录的水平。由于启动子一般都是在基因的上游,启动子所在的位置或是转录起始点会由+1开始编号。上游的位置所以都是由+1逆数的负数,例如-100就是位置100的上游碱基对。以下是各种启动子:

如何阅读质粒图谱

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。

一个合格质粒的组成要素

  1. 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。
  2. 抗生素抗性基因 可以便于加以检测,如Amp+ ,Kan+
  3. 多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段
  4. P/E 启动子/增强子
  5. Terms 终止信号
  6. 加poly(A)信号 可以起到稳定mRNA作用

如何阅读质粒图谱

第一步:首先看Ori的位置,了解质粒的类型(原核/真核/穿梭质粒)

ORF cDNA 和CDS的区别

1,什么是全长ORF克隆?

答:一个全长ORF(开放阅读框)克隆是指一个插入有编码全长蛋白质的DNA片断的质粒。该插入DNA片断只含有编码一个全长蛋白质的序列(从起始密码到终止密码),而不包含有5′或3′端的非翻译区(UTRs)或内含子

2,为什么应该选择全长ORF克隆而非其他的全长cDNA克隆

答:全长ORF克隆只含有全长蛋白质的编码序列而其他全长cDNA克隆则还包含一些非翻译的序列,如5'端或3'端非翻译区。众所周知,在表达宿主中, 这些非翻译的序列可能会对所需编码蛋白质的转录和翻译过程有负面的影响。

什么是cDNA克隆

cDNA克隆是从基因的转录产物(如mRNA)开始,逆转录合成互补DNA(cDNA),然后重组入载体,经过复制,筛选得到单一种cDNA分子的技术。

cDNA克隆法操作流程

首先是逆转录酶和cDNA第一链的合成。逆转录酶是DNA或者RNA依赖的DNA聚合酶,可以利用DNA或者RNA合成DNA。cDNA的克隆主要是通过寡聚胸腺嘧啶从3’A尾巴开始合成cDNA,但这样得到的cDNA克隆中有10%~15%没有3’端的序列;6到9个核苷酸随机引物也可用于逆转录的反应中,这对于长转录本5’端的扩增很有利,但是这样的方法不能得到全长cDNA;其次是合成cDNA第二链。单链cDNA3’端的发卡结构,便于DNA聚合酶I发挥5’→3’聚合酶活性,合成cDNA的第二链;最后将双链cDNA克隆到质粒和噬菌体载体中进行扩增,最后进行测序,研究转录本的信息以及功能。

cDNA克隆法的应用

真核生物DNA的结构中有内含子和外显子。内含子并不表达蛋白质,如果直接剪接真核生物的DNA的话,内含子肯定是很难去除,这样连接到表达载体(一般都是原核生物)后表达出来的蛋白质就不再是目的蛋白质。所以用真核生物细胞中的mRNA为模板,再经反转录为cDNA后,也就除去了原本应该有的内含子。再经PCR扩增,就能得到大量的目的基因了。

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