细胞转染

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主 细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后 24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染，外源DNA既可以整 合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体（episome）存在。

服务内容：

1. 脂质体转染法

   脂质体（lipofectin regeant，LR）试剂是阳离子脂质体N-[1-2，3-Dioleyoxy， Propyl]-n， n，n-Trimethylammonium Chloride（DOTMA）和Dioleoyl photidye-thanolamine（DOPE）的混合物[1：1（w/w）]。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方便 的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需优化转染条件，应找出该批 LR对转染某一特定细胞适合的用量、作用时间等，对每批LR都要做：第一，先要固定一个DNA的 量和DNA/LR混合物与细胞相互作用的时间，DNA可从1-5ug和孵育时间6小时开始，按这两个参数绘出相应LR需用量的曲线，再选用LR和DNA两者最佳的剂量，确定出转染时间（2-24小时）。因LR对细胞有一定的毒性，转染时间以不超过24小时为宜。细胞种类：COS-7、BHK、 NIH3T3、Hela和Jurkat等任何一种细胞均可作为受体细胞。

2. 磷酸钙－DNA共沉淀法：

   磷酸钙－DNA共沉淀法中，核酸以磷酸钙－DNA共沉淀物的形式出现时，可使DNA附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%-5 %可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA可以与细胞DNA整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细胞转染是最常用并首选的方法。本公司的磷酸钙转染方法在传统的磷酸钙细胞转染方法的基础上进行了改良，提高了转染效率，并降低了毒性。HEK293或HEK293T细胞，即通常所谓的293细胞，是最适合磷酸钙法转染的细胞之一，优化条件后转染效率可以高达90%以上；通常很容易达到 40-50%左右的转染效率。大多数常见的细胞例如Hela细胞、CHO细胞等也都适合磷酸钙法转染，但效率比293细胞要略低一些。

3. 电穿孔转染法

   核酸不能自动进入细胞，需要协助才能穿过细胞壁的物理屏障进入能够进行表达和/或复制的胞内位点。电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。电穿孔的主要应用优势是适用的细胞范围广，不论真核细胞还是原核细胞都能被有效转染。当遇到某些脂质体转染效率很低和几乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70%的细胞。这种致命的后果根据细胞系的不同而异，与加热或电解无关，也与当时施加的能量与密度无关。相反，细胞死亡与电场强度与整体作用时间相关。我们公司针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，大大的降低了细胞的死亡率，同时也提高了电穿孔转染效率。

4. 腺病毒感染

   对于质脂体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用腺病毒感染，此法可以快速100％感染率，检测成功率高。

客户须知：

1. 客户提供生长状况良好的细胞株，同时提供细胞特性，培养条件及相关注意事项。
2. 我们也可以为客户代为购买细胞并且提供冻存保种服务。
3. 客户提供质粒，并详细说明该质粒的大小、浓度、抗性、拷贝数等相关背景资料。
4. 客户提供的质粒需要有检测标签如：EGFP或者LacZ等，如果没有的话我们将认为您的质粒的转染效率和做对照的pEGFP-N1质粒的转染效率一致；
5. 客户需选择转染方案或由我们推荐转染方案，如磷酸钙转染、质脂体转染等。
6. 本转染实验用3.5cm培养皿进行细胞培养。如果有特殊需要请说明，费用询价。

服务价格与周期：

交付结果：

1. 转染目的质粒前后的细胞培养图片和荧光图片或MTT检测数据；
2. 提供目的质粒的转染效率和转染方案
3. 需要细胞爬片及免疫荧光等服务请参考细胞荧光成像服务