mirshRNA真核表达载体构建
mirshRNA真核表达载体构建是用19nt的siRNA序列替代microRNA中的作用序列，保持microRNA的环和双臂结构。
普通的带有荧光标记（以绿色荧光为例）的shRNA真核表达框结构为：
polIII型启动子（如hU6）---shRNA---CMV promoter---EGFP---Poly A
这种shRNA表达框的优点是广谱表达，精确终止。但是由于用的是polIII型启动子，shRNA的表达量一般，且由于polIII型启动子的广谱表达性，容易造成非特异性干扰。
为了弥补上述不足，研究者们设计出了新型的mirshRNA真核表达框结构（以mir30结构为例）：
polII型启动子（如CMV promoter）---EGFP---mir30左臂---shRNA---mir30右臂---Poly A
这种mirshRNA真核表达框有以下优点：
- 由于采用了CMV等强启动子，shRNA表达量大大提高。
- 由于EGFP和shRNA连在一起，所以绿色荧光强度直接反映shRNA的表达量。
- 由于采用了microRNA的双臂，增强了Dicer酶的剪切效率，使得最终形成的siRNA的数量和干扰效率都大大提高。
- 启动子可换成组织特异性的polII型启动子，以实现对特定组织或细胞的特异性干扰。
由于mirshRNA真核表达框具有上述优点，现在已经有越来越多的研究者将其应用于RNA干扰研究中，冷泉港、Ambion等公司和机构都已推出了基于mir30的mirshRNA真核表达载体。
本公司根据以上结构，构建了自己的mirshRNA真核表达载体，结构和Ambion等公司的产品基本一致，而价格却要大大低于国外同类产品。
以此系列mirshRNA真核表达载体为平台，本公司可以为您构建shRNA表达量更高、干扰效率更好、能够做到特异性干扰的shRNA表达质粒，而且其价格和构建普通的shRNA真核表达载体一样，都仅仅只需1500元/条！订购四条以上还有优惠！
曾经，在软件设计出的shRNA序列有效性普遍偏低，RNA干扰效率较难提升的时候，mirshRNA结构的推出，受到过研究者们的极大追捧。然而，随着shRNA序列设计软件的逐步优化，RNA干扰实验中采用的shRNA序列的有效性大大提高，即使不采用mirshRNA结构，只用普通的polIII型启动子（如hU6）调控shRNA的表达，也能获得很高的干扰效率。所以，现阶段，进行普通RNA干扰实验时，已经很少采用mirshRNA结构。
但是，mirshRNA结构却依然有其用武之地。当您的RNA干扰实验需要做到特异性干扰，例如您希望导入的shRNA只在肿瘤细胞中表达及发挥作用，而在正常细胞里则低表达甚至不表达，从而在杀伤或抑制肿瘤细胞的同时，不损伤正常细胞，这个时候，则需要用到mirshRNA结构。使用这种结构，您可以随意地选取各种组织特异性或者肿瘤特异性启动子，达到组织或者细胞特异性干扰的目的。而这一点，用普通的polIII型启动子（如hU6）是做不到的。
pYrbio-Mir30-shRNA质粒图谱
内源性mir-30结构
mir30-shRNA结构
mirshRNA真核表达载体构建服务价格及周期：
| 项目 | 价格 | 周期 |
|---|---|---|
| mirshRNA表达载体构建 （默认为CMV启动子） | 1500元/条 | 2~3周 |
| NC对照 （默认为CMV启动子） | 500元（三条以上免费赠送） | 现货 |
| 更换启动子 | 1500~2000元 | 2~3周 |
| 转染级质粒大提（100ug） | 300元/个 | 2~3天 |
| 测序 | 免费 | 2~3天 |
客户须知：
- 请事先确定选用默认的CMV启动子还是其它特异性启动子。
- 本公司可根据客户需要，将CMV启动子更换为其它启动子。启动子可以由客户提供，亦可从本公司的Yrbio启动子库购买。更换启动子的相关费用按照“基因克隆”实验费用计算，根据启动子长度而定。
- 由于小提质粒在转染细胞时，无论是浓度、纯度还是内毒素含量均不是很合格，所以本公司建议您订购一个“转染级质粒大提”服务，优惠价300元/个，至少提供转染级大提质粒100ug。