单克隆抗体制备

抗原准备

1. 用作免疫的抗原可以是蛋白或多肽，这些抗原可由您提供或由您委托我们制备；
2. 如果您的多肽抗原＜8 kDa，则需要与KLH或其他载体偶联。
3. 注：若抗原由您提供，请提供符合技术要求数量足够的抗原，3-4mg蛋白（SDS-PAGE纯度大于90%），或两种不同交联的多肽各2-3mg（要求纯度大于90%），作为免疫和筛选用。

免疫和抗血清检测

1. 抗原免疫3-5只Balb/c小鼠，对免疫后血清按客户要求进行检测，检测内容包括进行ELISA、WB、IHC、IF等鉴定。
2. 提供免疫前阴性血清50μl。

克隆筛选

1. 当各项检测达到客户要求时取小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合；
2. 经过多次筛选获得阳性的单克隆细胞株。如果需要，可选择多个克隆上清送给客户作进一步检测，客户选定的克隆可继续有限稀释直到100%阳性或直接扩大培养；
3. 提供2-8个杂交瘤细胞株。

大量制备

使用客户选择的克隆进行腹水生产，每个克隆提供10-20ml腹水。

纯化

1. 蛋白A/G纯化
2. 辛酸硫酸胺沉淀纯化

抗体检测

单克隆抗体制备

1. 对纯化后的抗体按客户要求选择进行ELISA、WB、IHC、IF等鉴定，出具检测报告。
2. 按照常规单抗制备流程得到多株杂交瘤克隆，用棋盘式夹心ELISA筛选适合做夹心ELISA的单克隆抗体对。用一未标记抗体包被多孔板，然后加入标准抗原，再加入被生物素标记的同种或不同种抗体，继续ELISA检测操作。从中筛选出对同种标记抗体加入后OD值不升高，而加入不同种标记抗体后OD值明显升高的抗体。
3. 用选定的单克隆抗体对做棋盘式ELISA实验，优化抗体的各自用量。用标准品做ELISA检测曲线，与现有ELISA试剂盒做对照。检测使用不同单克隆抗体对的ELISA检测抗原的灵敏度。
4. 用已有ELISA诊断试剂盒做对照，将含抗原或不含抗原的测试血清或其它供检测生物样品加入到一抗包被的多孔板种，检测实验建立的用于ELISA的单克隆抗体对与已有的ELISA试剂盒检测结果是否存在一致性。并检测对同一样品检测结果的重复性和对抗原的回收率。选择各项检测结果最好的单克隆抗体对做ELISA试剂盒。

单克隆抗体制备服务价格和周期

针对客户抗体制备，我们推出一项多肽抗原合成的优惠服务：

用于抗体制备的多肽序列长度一般为10-25个氨基酸，我们将以优惠价格合成此类多肽。

三明治抗体筛选定制

1. 按照常规单抗制备流程得到多株杂交瘤克隆，用棋盘式夹心ELISA筛选适合做夹心ELISA的单克隆抗体对。用一未标记抗体包被多孔板，然后加入标准抗原，再加入被生物素标记的同种或不同种抗体，继续ELISA检测操作。从中筛选出对同种标记抗体加入后OD值不升高，而加入不同种标记抗体后OD值明显升高的抗体。
2. 用选定的单克隆抗体对做棋盘式ELISA实验，优化抗体的各自用量。用标准品做ELISA检测曲线，与现有ELISA试剂盒做对照。检测使用不同单克隆抗体对的ELISA检测抗原的灵敏度。
3. 用已有ELISA诊断试剂盒做对照，将含抗原或不含抗原的测试血清或其它供检测生物样品加入到一抗包被的多孔板种，检测实验建立的用于ELISA的单克隆抗体对与已有的ELISA试剂盒检测结果是否存在一致性。并检测对同一样品检测结果的重复性和对抗原的回收率。选择各项检测结果最好的单克隆抗体对做ELISA试剂盒。