MicroRNA的过表达、下调及检测

服务简介:

MicroRNA (miRNA) 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA,其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因,而几个miRNA也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达,也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某个基因的表达。据推测,miRNA调节着人类二分之一的基因。

一、MicroRNA的过表达

MicroRNA存在多种形式,最原始的是pri-miRNA ,长度大约为300-1000个碱基pri-miRNA经过一次加工后,成为pre-miRNA 即microRNA前体,长度大约为70-90个碱基;pre-miRNA再经过Dicer酶酶切后,成为长约20-24nt的成熟miRNA 。

实际研究中,pre-miRNA应用最早,也最广泛,目前很多商业化的MicroRNA库都是pre-miRNA形式的。近几年来,研究发现microRNA的双臂对成熟miRNA的形成有着十分重要的作用,所以天然的pri-miRNA形式越来越多地被研究者采用。

赢润生物既拥有pre-miRNA库,也拥有pri-miRNA库,大部分的pre-miRNA或pri-miRNA都已构建至表达载体上,您可以直接购买使用。

图2. 5 赢润生物构建的pri-miRNA表达载体示例(has-I et-7e)
图2. 6 赢润生物构建的pri - miRNA表达载体示例C has - m i r - 130b)

TIPS : pri-miRNA过表达,miRNA能够提升多少?

  1. 如果目的细胞中已有目的miRNA的高表达:大约提升2-5倍;
  2. 如果目的细胞中目的miRNA低表达或无表达:大约提升到50-1000倍。

二、MicroRNA的下调

赢润生物可以提供化学合成的miRNA inhibitors ,用于下调目的细胞中的miRNA ,以实现loss-of function研究。

如果您需要进行长期、稳定的miRNA下调,则可以选用赢润生物构建的载体形式的miRNA inhibitor。其转染效率高,下调效果好,可以实现对目的miRNA的长期、稳定的下调。

赢润生物载体形式的miRNA inhibitor,采用的是miRNA sponge法,这也是目前SCI文献中用的较多的一种方法。

图2.7 miRNAsponge原理示意图

三、MicroRNA的检测

针对目前所有己在mirBase数据库中登录的miRNA,赢润生物均可提供miRNAqPCR检测引物套装(miRNA qPCR Detection Primer Set) ,一套只需要500元(包括U6内参引物) 。

赢润生物的miRNAqPCR 检测引物,采用的是Stem-loop法。这种方法是目前最常用, SCI文献采用率最高的一种方法,ABI 、Ambion等公司的相关产品使用的也是这种方法。

图2.8 miRNAqPCR检测 (Stem-loop法) 原理示意图

服务价格与周期:

服务内容

服务价格(元)

服务周期

MicroRNA 上调

pri-miRNA

3000

3-4 周

pri-miRNA 空载对照

500

现货

pre-miRNA

2000

2-3 周

pre-miRNA NC 对照

500

现货

miRNA mimics

600 (2 OD)

1-2 周

miRNA mimics NC 对照

200 (2 OD)

1-2 周

MicroRNA 下调

miRNAsponge

3000

3-4 周

miRNA sponge NC 对照

500

现货

miRNA inhibitors

600(20D)

1-2 周

miRNA inhibitors NC 对照

200 (2 OD)

1-2 周

miRNAqPCR 检测引物套装

YRBIO miRNA qPCR Detection Primer Set

500/套 ( 包括U6 内参引物)

1周