Real-Time PCR
所谓Real-Time PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。real-time PCR技术即实时荧光定量PCR避免了传统PCR以终产物监测定量产生的偏差，提高实验的重复性。该技术已经被广泛用于监测细胞mRNA表达量的变化；比较不同组织的mRNA表达差异；验证基因芯片，siRNA干扰的实验结果。
Real-Time PCR操作流程：
Real-Time PCR操作流程- 根据客户提供的已知全长基因序列及待检基因的背景信息，我们设计并合成Realtime PCR引物
- RNA抽提：提供组织、细胞等来源样本的RNA抽提服务，并将RNA反转录为cDNA
- 制备标准曲线样品
- 标准曲线样品和待测样品分别加入到含SG的RealTime PCR反应液中，进行RealTime PCR扩增和检测
- 检测结果进行标准曲线分析
- 提供实验报告：包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR实验结果的相关图表。
Real-Time PCR服务要求：
- 客户须在实验开始前确保其细胞或组织中有目的基因的表达，并提供目的基因的相关信息。
- 提供足量待检测目的基因的有关材料，共同探讨服务的可能性和技术路线。
- RT-PCR过程中的所需引物，您可以委托本公司设计合成，也可以由您提供。
- 引物必须是PAGE纯化的高质量的干粉，一般我们不接受已溶解的引物。
Real-Time PCR收费标准:
| 服务项目 | 服务内容 | 服务价格 | 服务说明 |
|---|---|---|---|
| RNA提取 | 从细胞或组织中提取RNA | 80.00/样品 | 试剂盒提取，大量样品优惠 |
| 引物合成 | 合成PCR扩增所需引物 | 1.50/碱基 | 染料赠送、探针标记为1200元/条 |
| 逆转录 | 逆转录合成cDNA第一链 | 80.00/样品 | 逆转录试剂盒 |
| RealTime PCR标准曲线制备数据分析 | 一个指标 | 120.00/基因 | 标准曲线制备及看家基因内参免费 |
| 两个指标 | 200.00/基因 | ||
| 三个指标 | 270.00/基因 | ||
| 三个指标以上 | 80.00/样品 | ||
| HRM检测 | 饱和染料HRM检测 | 200.00/指标 | SNP位点突变等，详情询问。 |
| 基因型分析 | 合成PCR扩增所需引物 | - | - |
Real-Time PCR主要应用:
- DNA或RNA的绝对定量分析：包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测，RNAi基因失活率的检测等
- 基因表达差异分析：比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异（如药物处理、物理处理、化学处理等），特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA 芯片或差显结果的确证
- 基因分型：SNP检测
检测仪器:
Bio-Rad CFX96 、Rotor-gen MX3000P、Roche LC480II