酵母双杂交系统

服务简介

酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid system)的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。细胞起始基因转录需要有反式转录激活因子的参与。反式转录激活因子，例如酵母转录因子 GAL4在结构上是组件式的（modular），往往由两个或两个以上结构上可以分开，功能上相互独立的结构域（domain）构成，其中有DNA结合功 能域(DNA binding domain, DNA-BD)和转录激活结构域（activation domain，DNA-AD）。这两个结合域将它们分开时仍分别具有功能，但不能激活转录，只有当被分开的两者通过适当的途径在空间上较为接近时，才能重新呈现完整的GAL4转录因子活性，并可激活上游激活序列（upstream activating sequence, UAS）的下游启动子，使启动子下游基因得到转录。

在酵母双杂交系统中，“诱饵”蛋白X克隆至DNA-BD载体中，表达DNA-BD/X融合蛋白；待测试蛋白Y克隆至AD载体中，表达AD/Y融合蛋 白。一旦X与Y蛋白间有相互作用，则DNA-BD和AD也随之被牵拉靠近，恢复行使功能，激活报告重组体中LacZ和HIS3基因的表达。

特点与优点：

1. 相互作用的信号是在融合基因表达后，在酵母细胞内重建完整的转录因子结构的作用而给出的，省去了纯化蛋白质的繁琐步骤；
2. 检测在真核活细胞内进行，可以在一定程度上代表研究材料细胞内真实情况；
3. 检测的结果可以是基因表达产物的积累效应， 因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用；
4. 酵母双杂交系统可采用不同组织、器官、细胞类型和分化时期材料构建cDNA文库， 能分析细胞浆、细胞核及膜结合蛋白等多种不同亚细胞部位及功能的蛋白；
5. 可以用来比对病变组织，更快的找到突变基因或者导致变异的蛋白，更快的找到攻克方向；
6. 利用研究的已知蛋白基因为诱饵，在已经构建好的某组织材料特异表达的cDNA酵母AD文库中钓取可能的互作蛋白；
7. 采用Yeast mating策略，实现酵母AD文库使用的反复性，在大规模高效筛选的同时缩减了研究成本。

技术步骤

1. 将待测基因与Gal4或LexA或其他合适蛋白的DNA结合域融合构建诱饵质粒；
2. 将诱饵质粒转化缺乏报告基因启动子的酵母细胞株中，选择被转化的酵母；
3. 再将文库质粒转化到酵母中；
4. 通过报告基因的功能筛选相互作用的蛋白。

应用领域

1. 利用酵母双杂交发现新的蛋白质或蛋白质的新功能
2. 利用酵母双杂交在细胞体内研究抗原和抗体的相互作用；
3. 利用酵母双杂交筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影

为客户构建指定的酵母双杂交基因文库。由客户提供组织、细胞或总RNA。

服务完成时提交：

A 详细的实验报告

B 该酵母文库甘油冻存管

服务价格及周期：